تعیین کمی و سریع DNA برای تعیین توالی نسل بعدی

تعیین کمی و سریع DNA برای تعیین توالی نسل بعدی


محتوای حمایت شده برای شما آورده می شود

فناوریهای توالی یابی DNA / RNA مدرن ، که عموماً به عنوان “توالی یابی نسل بعدی” (NGS) شناخته می شوند ، به ما این امکان را می دهند که توالی های اسید نوکلئیک را در بازدهی بالا رمزگشایی کنیم. بنابراین ، بسیار سریعتر و ارزان تر از توالی سنجر نسل اول. با توجه به توانایی آنها در تشخیص جهش هایی که باعث بیماری می شوند ، فناوری های NGS در پزشکی شخصی اهمیت روزافزونی پیدا کرده است.

قبل از تعیین توالی ، نمونه DNA تجزیه شده و به آداپتورها متصل می شود تا یک کتابخانه ایجاد شود. مقدار نمونه باید به درستی تنظیم شود تا به تکه تکه شدن مطلوب برسد. علاوه بر این ، تأیید صحیح DNA هنگام جمع آوری کتابخانه های مختلف مهم است. بنابراین ، تأییدیه DNA یک گام مهم در گردش کار NGS است و کیفیت آن برای عمق ، پوشش و تکرارپذیری نتایج توالی بسیار مهم است.

صدور گواهینامه DNA مبتنی بر جاذب یک رویکرد مستقیم را ارائه می دهد که از انقراض زیاد داخلی nids هسته ای در 260 نانومتر استفاده می کند ، روش مبتنی بر فلورسانس روش ترجیحی برای NGS است. آنها از رنگهای فلورسنت استفاده می کنند که معمولاً با رشته های بذر اسید نوکلئیک به یکدیگر متصل می شوند و در صورت پیوند سیگنال های فلورسانس بالایی تولید می کنند و تشخیص DNA با حساسیت بالا را ممکن می سازد.

مکعبTM استاندارد طلا را برای کمی کردن دانه های اسید نوکلئیک برای اهداف NGS نشان می دهد. در کنار Qubit ، سیستم های دیگر مانند Quant-ITTM پیکوگرینTM کیت صدور گواهینامه dsDNA یا AccuBlue3 کیت های کمی NextGen DSDNA بر اساس همان اصل است.

NGS حجم کار و توان را با شناسه های نوکلئیک تغییر داده است. بر این اساس ، اهمیت افزایش توان در طول آماده سازی نمونه – به ویژه گواهینامه DNA – نیز در حال افزایش است. روشهای ابعادی موجود را می توان به راحتی با استفاده از دستگاه خواننده میکروپلیت و صفحات 96 ، 384- و یا 1536 حلقه چاه به جای یک فوتومتر یا فلورومتر کلاسیک ، که فقط می تواند یک نمونه را در یک زمان نگه دارد ، انتقال دهد.

مقایسه روشهای صدور گواهینامه بذر اسید نوکلئیک متداول توجه داشته باشید برنامه کاربردی توجه داشته باشید 352 (شکل 1A) در حالی که تشخیص مبتنی بر جاذب غلظتهای بالا را به خوبی ترسیم می کند ، روشهای مبتنی بر فلورسانس کل محدوده جستجو را پوشش می دهد.

شکل 1. صدور گواهینامه DNA و ارزیابی خلوص: (الف) مقایسه روشهای صدور گواهینامه DNA بر روی Reader CLARIOstar® Plus BMG LABTECH. حداقل حد تشخیص بر اساس اندازه گیری منحنی استاندارد محاسبه شد. محدودیت های جستجو بر روی مشخصات خواننده کیت تعیین شد. (ب) طیف جاذب نمونه های خالص و آلوده DNA. BMG Labtech

هنگامی که از نظر کمی نامطلوب باشد ، اندازه گیری های جاذب مزایای قابل توجهی را در آزمایش دقت نشان می دهند (به یادداشت برنامه 362 مراجعه کنید). در اینجا ، آلاینده های حذف نمونه ، مانند نمک ها ، فنول ها ، پروتئین ها یا ذرات معلق ، جذب کننده را به ترتیب در 230 نانومتر ، 260 نانومتر ، 280 نانومتر یا 340 نانومتر تغییر می دهند و باعث تغییر طیف می شوند (شکل 1b) طیف سنج UV / vis BMG LABTECHS طیفی از 220-1000 نانومتر <1 ثانیه / چاه را می گیرد. این اجازه می دهد تا خلوص DNA را در طول موج های متعدد بدون صرف زمان اضافی بررسی کنید.

BMG Labtech طیف وسیعی از خوانندگان ریز صفحه را برای اندازه گیری اسیدهای نوکلئیک ارائه می دهد. خواننده چند حالته FLUOstar3 امگا ، کلارواستار3 بیشتر، و Pherastar3 FSX هر دو اندازه گیری مبتنی بر جاذب و فلورسانس را با حساسیت بالا و توان بالا فعال کنید. به دنبال پیشرفت های اخیر در فناوری توالی یابی ، انتقال گواهی بذر اسید نوکلئیک را به شکل سریعتر ، دقیق تر و کوتاه تر امکان پذیر می کند. اصلاح روش ها برای توان بیشتر باعث صرفه جویی در هزینه و زمان می شود. با ادغام خواننده های ریز صفحه در یک جریان کاری خودکار ، زمان کار را می توان بیشتر کاهش داد.

اگر علاقه مند به جزئیات بیشتر در مورد تأیید DNA یا تأیید خلوص هستید ، لطفاً اینجا با ما تماس بگیرید [email protected] یا به ما سر بزنید www.bmglabtech.com

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *